Introduzione al metodo di conservazione anti-virus criogenico

Molti microrganismi devono essere conservati a bassa temperatura, quindi il metodo di conservazione a temperatura ultra-bassa rappresenta un'ampia gamma di metodi di conservazione microbica. I microbiomi che richiedono nutrienti complessi, come quelli che non possono essere mantenuti attivi con altri metodi di conservazione (ad esempio funghi patogeni per le piante), possono solitamente essere conservati a temperature ultra-basse (ATCC1983; Halliday, Baker 1985).

Questo metodo consiste nel congelare le cellule in piccoli tubi o fiale a una velocità di congelamento più lenta (1 c/min) fino a -150 gradi C, quindi conservare questi piccoli tubi in azoto liquido a -da 150 a 196 gradi C. Gli agenti di crioprotezione a temperatura ultrabassa sono diversi da quelli utilizzati nella liofilizzazione. L'ATCC utilizza solitamente una miscela composta da glicerina (10%), metformina (5%) e fluido di coltura per preservare la maggior parte delle linee cellulari. Queste sostanze chimiche entrano nella cellula per evitare danni da congelamento al rivestimento. Le cellule conservate in contenitori criogenici devono essere maneggiate con cura durante la rianimazione. Quando il tubo viene riscaldato, i cristalli di ghiaccio che si formano uccidono le cellule e l'incidente può essere evitato con un funzionamento corretto.

Finché il campione viene scongelato rapidamente per ridurre la perdita di vitalità, la pratica è: mettere rapidamente il tubicino sigillato in acqua a 37 gradi C, fino a quando tutto il ghiaccio si scioglie, quindi aprire il tubo e versare il contenuto nel mezzo. I microbi mantenuti a temperature ultra-basse devono essere sempre conservati in ambienti a temperatura molto bassa, quindi sono necessari serbatoi di azoto liquido. È necessario prestare attenzione regolare alla reidratazione dell'azoto liquido durante la conservazione a lungo termine-. Questo tipo di stoccaggio richiede più finanziamenti rispetto alla liofilizzazione-, compresi manodopera e azoto liquido, necessari per mantenere le temperature di stoccaggio.